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Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(P1041-P1042-P1043-P1044)

促销: 380.00~19000.00
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P1041(250U) P1042(1000U) P1043(3000U) P1044(18000U)

Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶

Cat. #P1041P1042P1043P1044

产物简介

东盛生物Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶是一种立异型的化学润色热启动酶,该酶在室温下活性被完全封锁,依靠温度激活酶活性,可有用削减非特异性扩增,具有很是高的特异性。扩增片断长度可达5 kb(简单模板)。延长速度为2min/kb70-75℃,简单模板可达20s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。扩增产品具有3'-dA结尾。Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶采用进步前辈的化学润色手艺出产,动物源性DNA污染为零,不变性更强,具有抗体法热启动酶不成对比的上风。同时,预变性时候缩短至3分钟,工作效率比年夜大都化学润色法热启动酶更高,是一款很是新奇、适用的产物。

产物构成

Component

P1041

250U

P1042

1,000U

P1043

3,000U

P1044

18,000U

Optimus? Hotstart Taq DNA聚合酶(5U/μl

50 μl

200 μl

200 μl × 3

100 μl× 36

10× Hotstart BufferMg2+ Plus[1]

1.25 ml

1.25 ml× 2

1.25 ml × 6

1.25 ml × 36

6× Loading Buffer[2]

1 ml

1 ml

1 ml

-

[1] 10× Hotstart Buffer分为Mg2+ PlusMg2+ Free两种包装,可便利选择。如无特殊申明供给Mg2+ Plus缓冲液。Mg2+ Free10× Hotstart Buffer供给25 mM MgCl2

[2] P1044不含6× Loading Buffer,若有需要请零丁采办(Cat. #M9041)。

本产物不含dNTPs,若有需要请零丁采办(Cat. #P9011/P9012/P9013)。

活性界说

一个活性单元(U)指用活性化的年夜马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃30 min内,摄进10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保留前提

-20℃保留2年。

质量节制

纯度检测:经质量检测,产物不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测:PCR方式检测无宿主残存DNA,能有用扩增人基因组中的单拷贝基因。

应用举例

1. 配制反映系统

请于冰上设置装备安排反映系统,系统巨细与组分用量与添加挨次可调整:

Ordinal

Component

Volume

(50 μl reaction volume)

Final   concentration

(50 μl reaction volume)

1

10× Hotstart BufferMg2+ Plus

5 μl

2

dNTPs2.5mM

4 μl

0.4 mM

3

upstream primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4 μM

4

downstream primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4 μM

5

Optimus? Hotstart Taq   DNA聚合酶(5U/μl[2]

0.5 μl-1 μl

2.5U-5U

6

template DNA[3]

1-4 μl

<1μg

7

超纯水[4]

To 50 μl

-

optional

MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[5]

Variable

-

[1] 引物终浓度建议规模:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可进步浓度。

[2] 按照目标片断扩增的难易水平调整DNA聚合酶的用量。

[3] 分歧模板最佳用量分歧,部门DNA模板建议用量如下表(50 μl反映系统)。

Template

Dosage

人类基因组DNA

0.1μg-1μg

λDNA

0.5ng-5ng

年夜肠杆菌基因组DNA

10ng-100ng

质粒DNA

0.1ng-10ng

[4] 可零丁订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

[5] 可零丁订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

2. 设定反映法式进行PCR反映

Stage

Temperature

Time

Number of Cycles

Initial Denaturation

94℃

3 min

1

Denaturation

94℃

30 sec

25-35

Annealing

55-68℃[1]

30 sec

Extension

72℃

Variable[2]

Final Extension

72℃

5-10 min

1

[1] 退火温度应按照Tm值较低的引物来设。

[2] 延长时候按2min/kb来设最佳(简单模板可达20s/kb)。

3. 阐发成果

将产品与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳,经由过程凝胶成像设备不雅察目标条带的扩增环境。若有需要,可进行割胶收受接管。

无产品或产品量少的改良办法有:1调整退火温度;2削减按捺剂的影响,如提取的基因组DNA中含有按捺扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后利用;3采用乙醇沉降洗脱,进步模板DNA的纯度;4利用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041MgCl2Cat. #P9031等可进步产量。

操纵留意事项

1 本产物采用改良的化学润色手艺,依靠温度激活DNA聚合酶,能有用按捺非特异性连系,可在室温下设置装备安排反映系统。

2 Hotstart Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,是以在PCR产品3'结尾凡是会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

引物设计留意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间;上下流引物3’结尾避免互补,避免呈现3个以上反复的GC,或呈现发夹布局,不然会发生非特异性扩增;GC含量节制在40-60%,且上下流引物GC含量尽量接近;Tm值节制在55-65℃之间,且上下流引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、润色等)长短模板匹配序列,不介进Tm值计较。

相关产物

名称

货号

规格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50/250

DSTM5000

M1111/M1112

60/300

高纯度质粒小提试剂盒

N1011/N1012/N1013

50/100/200

通用RNA提取试剂盒

R1051

50

基因组DNA快速提取试剂盒

N1111/N1112

50/100

DNA凝胶收受接管试剂盒

N1071/N1072/N1073

50/100/200

RT-PCR Kit

R1011/R1012

20/100

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