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PCR Mix(P2011-P2012-P2013-P2014-P2015)

促销: 120.00~4500.00
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P2011(1 ml) P2012(5 ml) P2013(10ml) P2014(50ml) P2015(100ml)

PCR Mix

Cat. #P2011P2012P2013P2014P2015

产物简介

PCR Mix浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必须组分(模板与引物除外)。利用时,仅需在扩增系统中插手模板和引物即可进行PCR,年夜年夜简化操纵过程,缩短操纵时候,降低污染(加样次数削减)同时,因为系统内含有加强剂,可以或许明显加强PCR扩增的活络度。扩增产品具有3’-dA凸起端,可直接用于TA克隆。

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来历的热不变重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片断的长度可达5 kb(简单模板)。延长速度为1min/kb70-75℃,简单模板可达10s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。

产物构成

Component

P2011

P2012

P2013

P2014

P2015

2× PCR Mix

1 ml

1 ml× 5

1 ml× 10

1 ml× 50

1 ml× 100

超纯水

1 ml

1 ml× 5

-

-

-

本产物分含系统中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。系统中包含溴酚蓝的产物,PCR扩增产品可直接电泳检测。这两类产物的扩增机能无差别。如无特殊申明供给系统中包含溴酚蓝的包装。

保留前提

-20℃保留2年。

质量节制

纯度检测:经质量检测,产物不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测:PCR方式检测无宿主残存DNA,能有用扩增人基因组中的单拷贝基因。

应用举例

1. 配制反映系统

请于冰上设置装备安排反映系统,系统巨细与组分用量与添加挨次可调整:

Ordinal

Component

Volume

(50 μl reaction volume)

Final   concentration

(50 μl reaction volume)

1

2× PCR Mix

25   μl

2

upstream   primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4   μM

3

downstream   primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4   μM

4

template   DNA[2]

1-4   μl

<1μg

5

超纯水[3]

To   50 μl

-

optional

MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[4]

Variable

-

[1] 引物终浓度建议规模:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可进步浓度。

[2] 分歧模板最佳用量分歧,部门DNA模板建议用量如下表(50 μl反映系统)。

Template

人类基因组DNA

λDNA

年夜肠杆菌基因组DNA

质粒DNA

Dosage

0.1μg-1μg

0.5ng-5ng

10ng-100ng

0.1ng-10ng

[3] 可零丁订购超纯水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

[4] 可零丁订购25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

2. 设定反映法式进行PCR反映

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

94℃

3   min

1

Denaturation

94℃

30   sec

25-35  

Annealing

55-68℃[1]

30   sec

Extension

72℃

Variable[2]

Final   Extension

72℃

5-10   min

1

[1] 退火温度应按照Tm值较低的引物来设。

[2] 延长时候按1min/kb来设最佳(简单模板可达10s/kb)。

3. 阐发成果

反映产品可直接进行琼脂糖凝胶电泳,经由过程凝胶成像设备不雅察目标条带的扩增环境。若有需要,可进行割胶收受接管。

无产品或产品量少的改良办法有:1调整退火温度;2削减按捺剂的影响,如提取的基因组DNA中含有按捺扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后利用;3采用乙醇沉降洗脱,进步模板DNA的纯度;4利用PCR添加剂,如PCR EnhancerCat. #P9041MgCl2Cat. #P9031等可进步产量。

操纵留意事项

1 室温下Taq DNA聚合酶有必然的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上设置装备安排反映系统,而且最后添加模板DNA

2 Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,是以在PCR产品3'结尾凡是会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺进的错误核苷酸数量。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5

引物设计留意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间;上下流引物3’结尾避免互补,避免呈现3个以上反复的GC,或呈现发夹布局,不然会发生非特异性扩增;GC含量节制在40-60%,且上下流引物GC含量尽量接近;Tm值节制在55-65℃之间,且上下流引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、润色等)长短模板匹配序列,不介进Tm值计较。

相关产物

名称

货号

规格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50/250

DSTM5000

M1111/M1112

60/300

高纯度质粒小提试剂盒

N1011/N1012/N1013

50/100/200

通用RNA提取试剂盒

R1051

50

基因组DNA快速提取试剂盒

N1111/N1112

50/100

DNA凝胶收受接管试剂盒

N1071/N1072/N1073

50/100/200

RT-PCR Kit

R1011/R1012

20/100

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