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DNA凝胶收受接管试剂盒(N1071-N1072-N1073)

促销: 240.00~820.00
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N1071(50次) N1072(100次) N1073(200次)

DNA凝胶收受接管试剂盒

 

产物组分

 

货号

N1071

50次)

N1072

100次)

N1073

200次)

溶液BD

20 ml

40 ml

80 ml

溶液PE

15 ml

15 ml×2

20 ml×3

溶液Eluent

2.5 ml

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

50

100

200

仿单

1

1

1


溶液PE初度利用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

溶液BD中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

上述产物组分均可零丁采办,详见产物索引。

产物申明

本产物采用了经典的硅胶膜手艺,用于从琼脂糖凝胶中收受接管DNA片断(50 bp-10 kb),也适合从PCR产品、酶促反映液中收受接管DNA,也可用于基因组DNA等样品的纯化。其纯化道理是含有目标片断的琼脂糖凝胶消融后,硅胶膜柱高效可逆地吸附系统中的DNA片断(高盐、低pH值),卵白及其它杂质不被吸附而被除往,被吸附的DNA片断在低盐、高pH值前提下再被洗脱纯化。一次可收受接管30μg高纯度DNA片断,此DNA片断可直接用于各类酶促反映等。

 

质量节制

1 % TAE琼脂糖凝胶中纯化50 bp1,000 bp10,000 bpDNA片断。

 

保留前提

室温保留2年。

 

留意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

溶液PE第一次利用前请按瓶上标签插手4倍体积的无水乙醇,即15 ml溶液PE中插手60 ml无水乙醇,20 ml溶液PE中插手80 ml无水乙醇,利用后当即盖紧盖子。

本产物对电泳利用的琼脂糖种类没有严酷限制。为了包管收受接管DNA的质量和收受接管效率,尽量利用高纯度的琼脂糖。

电泳时请利用新颖配制的TAE电泳缓冲液,以免影响电泳及收受接管结果。TBE电泳缓冲液中的硼酸与琼脂糖彼此感化天生的复合物会影响DNA的收受接管效率,是以TBE凝胶电泳不适适用于DNA收受接管。

请恰当耽误电泳时候,在条带分手清楚后进行切胶收受接管,以免收受接管到多余杂带。

为进步DNA收受接管收率,切胶时应尽量除往多余的胶块。

本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。但假如DNA浓度小或DNA初始量少,回

收率将会偏低。

溶液Eluent10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片断可直

接用于各类酶促反映等,不会影响后续试验。

为了包管收受接管效率,请不要利用未调整pH值的超纯水洗脱目标片断。

请严酷按照操纵步调操纵。


操纵步调--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

切取含有目标DNA片断的琼脂糖凝胶条带。

尽量切除不含有目标DNA部门的凝胶,削减凝胶体积,进步DNA收受接管率。

切胶时,请利用长波长UV360 nm)光盒。且不要将DNA长时候暴 露在紫外灯下,以防DNA毁伤。

称取凝胶的重量,近似地确定其体积。

凝胶重量的称量方式:取1.5 ml2 ml离心管,用电子天平称其初质量,切胶装在离心管后称终质

量,两者差即为胶的质量。分歧离心管的重量有差别,是以,每个离心管的重量需零丁称量。

按照每100 mg琼脂糖凝胶对应100 μl溶液BD的比例,向离心管中插手溶液BD

4  55℃-65℃水浴7-10min,直至凝胶完全融化。时代需要倒置夹杂3次。

琼脂糖必需完全融化,以免堵塞柱子,严重影响DNA片断的收受接管效率。

假如总体积年夜于500 μl,可恰当增添溶胶时候。

若此时溶液变红,可加10 μl 3M NaAcpH 5.2)。

如要从反映液中收受接管DNA,则向反映液中插手等体积的BD,充实混匀,后续步调不异:

将步调4所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min

胶块完全消融后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,由于纯化柱在较高温度时连系DNA的能力     较弱。

●  假如所获溶液过多,跨越DNA纯化柱容积(700 μl),可分次插手DNA纯化柱中。

6  12,000 rpm离心1min。若溶液体积年夜于DNA纯化柱的容积,可分两次离心,弃滤液。

此时DNA片断被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

插手500 μl溶液PE12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

溶液PE初度利用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

此步调的感化是将硅胶膜上吸附的卵白、盐等杂质洗脱,以获得高质量的DNA片断。

插手500 μl溶液PE12,000 rpm, 离心1min,弃滤液。

9  12,000 rpm离心3min,以彻底往除纯化柱中的液体。

此步调的感化是往除残留乙醇,避免影响后续酶促反映。同时也利于DNA片断的充实消融。

10  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中心处,悬空滴加30-100 μl溶液Eluent60℃预热),静置2min12,000 rpm 离心1min,管底即为目标DNA片断。贮存于-20℃

溶液Eluent可用无菌双蒸水取代,但其pH需为8.0-8.5,插手体积视DNA目标片断的几多、 用户对目标片断浓度要求而定。

对溶液Eluent 65℃预热,会进步提取DNA目标片断的产量。



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