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TRAzol(R1021-R1022)

促销: 160.00~540.00
运费 ¥0.00
R1021(20次) R1022(100次)

TRAzol

产物申明

TRAzol可以从动物组织、植物材料、各类微生物以及培育细胞等组织材猜中提取总RNA。样品在TRAzol中可以或许充实被裂解,在插手氯仿离心后,溶液会形成上清层、中心层和有机层(基层),RNA分布在上清层中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以收受接管获得总RNA。经本成品提取的总RNA纯度高,根基不含卵白质及基因组DNA,提取的RNA可以直接用于Northern杂交、黑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分化酶的庇护阐发、RT-PCR、构建cDNA文库等各类分子生物学尝试。

 

产物组分

货号

R102120次)

R1022100次)

TRAzol

20 ml

100 ml

仿单

1

1

需要自备氯仿、异丙醇、RNase-free 75%乙醇、DEPC处置水(R2041/R2042

 

保留前提

室温运输,2-8℃避光保留。

 

留意事项

●   TRAzol具有侵蚀性,操纵过程中应做好防护,避免直接接触皮肤或吸进口鼻。沾染后应当即用年夜量净水冲刷,需要时请就医处置。

●   谨防操纵情况、利用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操纵过程中勤换手套。

●   按照肇端材料量的分歧利用分歧体积的溶液(见下表)。过多或过少的利用量都可能影响RNA的质量或产量。若肇端材料量很少,RNA估计产量很低,在异丙醇沉淀时,可插手20 mg/ml肝糖原溶液0.5-1 μl促进RNA沉淀。

●   分歧肇端材料试剂用量及TRAzol用量。

样品用量

TRAzol的用量

10cm2的贴壁培育细胞

1 ml

107的悬浮培育细胞

1-2 ml

100 μl的白细胞

2 ml

50-100 mg的通俗组织样品

1 ml

50-100 mg的非凡组织样品(肝、脾、骨及软骨等)

2 ml

15-30 mg的植物材料(多糖和多酚含量不高的)

1 ml

●   利用本产物提取的RNA一般不含有DNA污染。在少少数环境下(与组织pH值等相关),假若有DNA污染而又必需往除,则可以用RNase-freeDNase处置样品。

●   防止DNA污染方式:a. 削减样本肇端用量,如将100 mg的植物组织削减为50 mg,将30 mg的动物组织削减为10 mg

                      b. 在插手TRAzol之后插手5-10 ul 3M NaAc(pH5.2)

●   请严酷遵循操纵步调操纵。

●   有关RNA的吸光度申明如下:

260 nm320 nm230 nm280 nm下的吸光度别离代表了核酸、布景(溶液混浊度)、盐浓度和卵白质等有机物的吸光度值。OD260/OD280R)表现了RNA中的卵白质等有机物的污染水平,质量较好的RNAR值应在1.8-2.0之间,当R<1.8时,溶液中的卵白质等有机物的污染比力较着;当R>2.2时,申明RNA已经被水解成了单核苷酸。在对核酸进行吸光度检测时,需要留意稀释液应利用TE Buffer

●   RNA浓度=OD260-OD320×稀释倍数×0.04 μg/μl

 

 

 

操纵步调

1.      尝试样品的研磨和匀浆

A. 贴壁培育细胞

倒出培育液,用1X PBS清洗一次,每10 cm2发展的培育细胞中插手1mlTRAzol,程度放置半晌,使裂解液平均分布于细胞概况并裂解细胞,然后利用移液枪奏乐细胞使其脱落(对于贴壁安稳的培育细胞可用细胞刮勺剥离细胞)。将内含细胞的裂解液转移至离心管中,用移液枪频频吹吸直至裂解液中无较着沉淀。室温静置5 min

B. 悬浮培育细胞

将悬浮培育细胞连同培育液一路倒进离心管中,8,000 rpm4℃离心2 min,弃上清,向每107个细胞中插手l-2 mlTRAzol。用移液枪频频吹吸直至裂解液中无较着沉淀,室温静置5 min

C. 动物组织、植物材料样品

将超低温冻结的RNA提取样品称量后敏捷转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不竭插手液氮,直至研磨成粉末状(无较着的可见颗粒,假如没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量)。对于通俗的RNA提取样品,可以向研钵中插手适量的TRAzol,将研磨成粉末状的样品完全笼盖,然后室温静置,直至样品完全融化,再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状。对于非凡样品,如肝、脾、骨及软骨等,可以将研磨成粉末状的样品插手到含有适量的TRAzol的匀浆管中,把匀浆管置于冰浴中进行匀浆,直至匀浆液呈无颗粒透明状。将匀浆液转移至离心管中,室温静置5 min12,000 rpm 4 ℃离心5 min,小心吸收上清液,移进新的离心管中(切勿吸收沉淀)。

 

2.      Total RNA的提取

向上述步调中的匀浆裂解液中插手氯仿(TRAzol1/5体积量),盖紧离心管盖,用力振荡(氯仿沸点低、易挥发,振荡时应小心离心管盖忽然弹开)。待充实乳化溶液呈乳白状(无分相现象)后,再室温静置2 min

2  12,000 rpm 4 ℃离心10 min

从离心计表情中小心掏出离心管,此时匀浆液分为三层,即:无色的上清液、中心的白色层及带有颜色的基层有机相,吸收上清液转移至另一新的离心管中(切忌吸出白色中心层)。

(如样品含有较多多糖多酚,请增添以下步调:在上清液中插手0.2X上清液体积的5 M NaCl1X上清液体积的酚/氯仿(1:1),混匀,12000 rpm离心5-10 min ,取上清液插手等体积氯仿,混匀,12000 rpm 离心 5-10 min,至第4步。)

向上清中插手等体积的异丙醇,上下倒置离心管充实混匀后,在15-30℃下静置10 min

5  12,000 rpm 4℃离心10 min。一般在离心后,试管底部会呈现沉淀。

 

3.      RNA沉淀的清洗

小心弃往上清,迟缓地沿离心管壁插手75%的乙醇1 ml(切勿触及沉淀),轻轻上下倒置洗涤离心管管壁,12,000 rpm4 ℃离心2 min后小心弃往乙醇(为了更好地节制RNA中的盐离子含量,应尽量除净乙醇),反复洗涤一次。

 

4.      RNA的消融

室温干燥沉淀2-5 min(不成以离心或加热干燥,不然RNA将会很难消融),插手适量的RNase-free水消融沉淀,需要时可用移液枪轻轻奏乐沉淀,待RNA沉淀完全消融后于-80℃保留。



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