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通用RNA提取试剂盒(离心柱型)(R1051)

价钱: 650.00
运费 ¥0.00
R1051(50次)

通用RNA提取试剂盒

产物组分

货号

R105150 次)

溶液 RL

60 ml

溶液 RPI

18 ml

溶液 RW

12 ml

DEPC处置水

10 ml

RNase-free 纯化柱

50

RNase-free 离心管

50

仿单

1

 

需要自备的溶液

  氯仿

  无水乙醇

 

产物申明

通用RNA提取试剂盒是颠末改良开辟的新一代产物,进步了裂解液的裂解能力和提取的活络度,经由过程在特定适宜的前提下特异、可逆地连系RNA,而各类卵白质和其他杂质均可被往除失落,同时改良的硅基质膜加强了对RNA的吸附能力,获得的RNA纯度更好,质量更高。该试剂盒可从各类细胞或组织中快速提取总RNA,每个吸附柱每次可处置50–100 mg 组织或5×106 细胞,可同时处置年夜量分歧样品,一个小时内即可完成反映。提取的总RNA没有DNA和卵白的污染,可用于Northern blotDot blotpolyA 筛选、体外翻译、RNase庇护阐发和分子克隆等。

 

保留前提

溶液RL应在2-8℃避光保留,其他溶液和纯化柱室温保留。

 

留意事项---------------------------------------------------------------------------------------------------------
  初度利用溶液RPI和溶液RW前,需按比例插手无水乙醇。18 ml溶液RPI中插手12 ml无水乙醇(3:2),12 ml溶液RW中插手48 ml无水乙醇(1:4)。

  谨防操纵情况、利用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操纵过程中勤换手套。

  利用本产物提取的RNA一般不含有DNA污染。在少少数环境下(与组织pH值等相关),假若有DNA污染而又必需往除,则可以用RNase-freeDNase处置样品。

  请严酷遵循操纵步调操纵。

  分歧肇端材料的用量及溶液RL的用量分歧(拜见下表),过多或过少的利用量都可能影响RNA的质量或产量。若肇端材料量很少,RNA估计产量很低,在异丙醇沉淀时,可插手20mg/ml的肝糖原溶液0.5-1 μl促进RNA沉淀。

样品用量

溶液RL的用量

10cm2的贴壁培育细胞

1 ml

107的悬浮培育细胞

1-2 ml

100 μl的白细胞

2 ml

50-100 mg的通俗组织样品

1 ml

50-100 mg的非凡组织样品(肝、脾、骨及软骨等)

2 ml

15-30 mg的植物材料(多糖和多酚含量不高的)

1 ml

  有关RNA的吸光度申明如下:

260nm320nm230nm280nm下的吸光度别离代表核酸、布景(溶液混浊度)、盐浓度和卵白质等有机物的污染水平,质量较好的RNAR值应在1.8-2.0之间,当R<1.8时,溶液中的卵白质等有机物的污染比力较着;当>2.2时,申明RNA已经被水解成单核苷酸。

  RNA浓度=OD260-OD320*稀释倍数*0.04 μg/μl

操纵步调---------------------------------------------------------------------------------------------------------

第一次利用前应在溶液 RPI、溶液 RW中插手无水乙醇,插手量请拜见瓶上标签。

1.  样品处置

组织:将组织在液氮中磨碎。每50–100 mg组织加1 ml溶液RL,用匀浆仪进行匀浆处置。样品体积不该跨越溶液RL体积的十分之一。

单层培育细胞:直接在培育板中插手溶液RL裂解细胞,每10 cm2 面积加1 ml溶液RL。用取样器抽打几回。

 溶液RL的插手量按照培育瓶面积决议,不是由细胞数决议。假如加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。

c.  细胞悬液:离心取细胞,弃上清。每5–10×106动物细胞和植物细胞插手1 ml溶液RL。加溶液RL前不要洗涤细胞,以免降解mRNA

2.  将匀浆样品在15–30℃放置5 min,使得核酸卵白复合物完全分手。

3.  可选步调:4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 离心5分钟,取上清,转进一个新的无RNase的离心管中。

 假如样品中含有较多卵白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部门等,可加此步调离心往除。离心获得的沉淀中包罗细胞外膜、多糖、高分子量DNARNA存在于上清溶液中。

(如样品含有较多多糖多酚,请增添以下步调,在上清液中插手0.2×上清液体积的5 M NaCl1×上清液体积的酚/氯仿(1:1),混匀,12000 rpm 离心5-10 min ,取上清液插手等体积氯仿,混匀,12000 rpm 离心5-10 min,至第4步。)

4.  插手200 μl氯仿,盖好管盖,猛烈振荡15 s,室温放置3 min

5.  4℃ 12,000 rpm离心10 min,样品会分成三层,从上至下依次是:无色的水相,白色的中心层和黄色的有机相,RNA首要存在于水相中,水相的体积约为所用溶液RL试剂的60%。把水相转移到新管中,进行下一步操纵。留意不要吸到中心层。

 第一次利用前应在溶液 RPI、溶液RW中插手无水乙醇,插手量请拜见瓶上标签。

6.  迟缓插手0.5 倍体积无水乙醇,混匀(此时可能会呈现沉淀)。将获得溶液和沉淀一路转进纯化柱中,4℃ 12,000 rpm离心30 s4℃ 12,000 rpm离心30 s,弃失落收集管中的废液。
 若溶液体积年夜于纯化柱容积(700 μl),可分两次离心。

7.  向纯化柱中插手500 μl溶液RPI利用前请先查抄是否已插手乙醇),4℃ 12,000 rpm离心30 s,弃废液。    

8.  向纯化柱中插手500 μl溶液RW利用前请先查抄是否已插手乙醇),室温静置2 min 4℃ 12,000 rpm离心30 s,弃废液。

9.  向纯化柱中插手500 μl溶液RW,室温静置2分钟,4℃ 12,000 rpm离心30 s,往除残存液体。

10.  将纯化柱放进2ml收集管中,4℃ 12,000 rpm离心2 min,往除残存液体。

 此步调的目标是将纯化柱中残存的漂洗液往除,离心后将纯化柱在室温放置半晌,或置于超净工作台上透风半晌,以充实晾干。假若有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等尝试操纵。

11.  将纯化柱转进一个新的离心管中,加30–100 μl RNase-free ddH2O,室温放置2 min4℃ 12,000 rpm离心2 min

 洗脱缓冲液体积不该少于30 μl,体积过小影响收受接管效率。RNA应保留在-70℃-80℃),以防降解。

 假如想进步RNA得率,可反复上步操纵一次,归并两次获得的溶液。

 


 


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